Sisu

• Sisu: Erinevus genoomikogu ja cDNA raamatukogu vahel
• Võrdlusdiagramm
• Mis on genoomikogu?
• Mis on cDNA raamatukogu?
• Peamised erinevused

Erinevate DNA-de eraldamiseks kasutatakse geenide kloonimisel genoomi raamatukogu ja cDNA raamatukogu. Mõlema raamatukogu erinevus seisneb selles, et genoomne raamatukogu sisaldab DNA fragmente, mis ekspresseerivad kogu organismi genoomi, samas kui cDNA raamatukogus võetakse mRNA organismi konkreetsetest rakkudest ja siis koosneb cDNA sellest mRNA-st reaktsioonis, mida katalüüsitakse ensüümi toimel.

Sisu: Erinevus genoomikogu ja cDNA raamatukogu vahel

• Võrdlusdiagramm
• Mis on genoomikogu?
• Mis on cDNA raamatukogu?
• Peamised erinevused

Võrdlusdiagramm

Alus	Genoomiraamatukogu	cDNA raamatukogu
Definitsioon	Genoomiraamatukogu on ühe organismi täieliku genoomse DNA kogum. DNA-d hoitakse sarnaste vektorite populatsioonis, millest igaüks sisaldab eraldiseisvat DNA sisestust.	CDNA raamatukogu on kloonitud cDNA fragmentide segu, mis on sisestatud peremeesrakkude valikusse, mis koos moodustab osa organismi transkriptoomist.
Väljendus	Kogu genoom	Ainult konkreetsed geenid.
Suurus	Suurem	Väiksemad
Intronid	Praegune	Puudub
Vektor	See kasutab suurte fragmentide paigutamiseks plasmiide, kosmiidi, lambda-faagi, YAC ja BAC.	See ei ole intron, nii et tagasihoidlike fragmentide mahutamiseks kasutatakse plasmiide, fagemiide ​​ja lambda-faagi.

Mis on genoomikogu?

Geenide kloonimisel kopeeritakse huvipakkuv geen organismist eraldatud DNA-st. Kui DNA eraldatakse organismist, on selle geenid ekstraheeritud korraga. Organismi DNA sisaldab tuhandeid erinevaid geene. Geenitehnik leiab ühe konkreetse geeni, mis kodeerib konkreetset huvipakkuvat valku.

Pole olemas ühtegi meetodit, mille abil konkreetne geen DNA-st on kättesaadav, seetõttu teevad teadlased geeniraamatukogud organismi DNA kataloogimiseks. Seejärel valivad teadlased raamatukogus soovitud geeni. Geenikogu on rühm elavaid bakterikolooniaid, mis on transformeeritud organismile ainulaadsete DNA tükkidega, mis on soovitud geeni päritolu. DNA ekstraheeritakse organismist raamatukogu ehitamiseks, mis on DNA organiseeritud vorm. Genoomne raamatukogu ja cDNA on kahte tüüpi geeni raamatukogud. Rekombinantse tehnoloogia geenistrateegiatena on kasutatud arvukalt geenide kloonimise tehnikaid.

DNA fragmendid eraldatakse tükeldamise teel lähte-DNA-st spetsiifiliste restriktsiooniensüümidega. Need fragmendid ligeeritakse vektormolekulide külge ja akumuleerunud molekulid viiakse peremeesrakkudesse, igas rakus 1 molekul. Genoomi raamatukogu koosneb intronitest, rämps-DNA-st ja mitmetest muudest fragmentidest. Selles raamatukogus purustatakse DNA raku sees väiksemateks fragmentideks. Pärast seda sisestatakse raamatukogu loomiseks kõik väikesed osad vektorisse. Genoomne raamatukogu sisaldab kogu geenide kogu DNA-d ja rakk sisaldab kõiki nende introne. Genoomne DNA on kogu genoomi translatsioon. Intronite suuruse tõttu ei kodeeri see ühe koodoni tervet osa. Genoomikogus puuduvad splaissimismehhanismid, mis tekitaksid raskusi sellest raamatukogust võetud geenide ekspressioonis.

Mis on cDNA raamatukogu?

cDNA raamatukogu ehitamiseks valitakse üks koe- või rakutüüp. Seejärel eraldatakse sellest koest või rakust mRNA. MRNA molekuli DNA koopia koosneb spetsiifilisest ensüümist pöördtranskriptaasi ensüümist. CDNA raamatukogu sisaldab seda spetsiifilist DNA-d, mis on mRNA-s. Selles raamatukogus ei leidu introne ega DNA järjestust. Selles raamatukogus on kõik kloonid täispikad. Lisaks on cDNA kloon oluline rakkude transfekteerimiseks valgu tootmiseks või rakupõhistes testides.

Peamised erinevused

1. Genoomiraamatukogu kirjutati otse genoomsest DNA-st.
2. cDNA raamatukogu moodustati, kasutades matriitsina mRNA-d.
3. Geenivaramu hõlmab kogu selle organismi genoomi.
4. cDNA raamatukogu esindab ainult konkreetsete vaevuste geene.
5. Kaks ensüümi, restriktsiooni endonukleaasid ja ligaasid, on genoomraamatukogu ehitamiseks olulised.
6. Pöördtranskriptaasi ensüüm mängib olulist rolli cDNA raamatukogu ehituses.
7. Genoomne raamatukogu hõivab nii prokarüootsete kui ka eukarüootsete organismide DNAd.
8. cDNA raamatukogu esindab just eukarüootsete organismide DNA-d.
9. cDNA raamatukogu on võimeline genoomi ekspresseerima prokarüootsetes bakterites, kuna neil puuduvad intronid.
10. Genoomiraamatukogu ei suuda prokarüootses organismis öelda, kuna neil on intronid ja prokarüootsel organismil puuduvad masinad intronite töötlemiseks.